Descriere
Utilizarea preconizata
Kitul Elisa CTK Vitamina B12 este un test de imunoadsorbtie cu enzima legata in faza solida (Elisa) pentru determinarea cantitativa a nivelului de vitamina B12 (VB12) in serul uman. Acest kit este destinat utilizarii doar de catre profesionisti.
INTRODUCERE
Vitamina B12 (Cobalamina) este o vitamina B esentiala, solubila in apa, care joaca un rol important in sinteza ADN-ului, metabolismul proteinelor, formarea de hematii, si intretinerea sistemului nervos central.1 Deficitul de vitamina B12, in general cauzata de aportul inadecvat sau sindromul de malabsorbtie, este comuna in tarile in curs de dezvoltare si in randul persoanelor in varsta, vegetarienilor si persoanele cu afectiuni gastro-intestinale. Deficitul de vitamina B12 cauzeaza de obicei anemie si anemia pernicioasa, pierderi de echilibru, amorteala sau furnicaturi in brate si picioare, si slabiciune.
Daca este lasata netratat, acesta va duce la anemie macrocitara, boli neurologice si tulburari cognitive. In plus, copiii cu deficienta severa de B12 pot suferi intarzieri severe de dezvoltare, de multe ori fara o recuperare completa 1-3.
Vitamina B12 serveste ca un cofactor in productia de biomolecule critice: conversia acidului metilmalonic in succinil-CoA, precum si generarea de metionina sau cisteina la homocisteina4. Astfel, scaderea nivelurilor de B12 circulanta in ser/plasma, si cresterea de acid malonic si homocisteina, pot servi ca indicatori de diagnostic pentru deficitul de vitamina B12. Testele initiale de laborator pentru deficitul suspectat de B12 trebuie sa includa masurarea nivelului seric de B12 printr-un test imunologic ELISA si o hemoleucograma completa. La pacientii care prezinta simptome de deficit, dar au niveluri serice normale de B12, sau sunt considerate cu "risc ridicat" dar sunt asimptomatice, masurarea acidului metilmalonic si/sau homocisteinei in ser, poate fi, de asemenea, folosita pentru a confirma deficienta.
PRINCIPIUL DE TESTARE
Kitul ELISA CTK Vitamina B12 este un test de imunoadsorbtie cu enzima legata in faza solida (ELISA) pentru determinarea cantitativa anivelului de vitamina B12 (VB12) in serul uman.
Kitul ELISA CTK Vitamina B12 este format din patru componente cheie:
1) Microgodeuri solide, pre-captusite cu streptavidina,
2) Calibratori VB12,
3) Reactivul biotina VB12 format din conjugat purificat de anticorpi IgG de iepure anti-vitamina B12 biotinilati
4) Reactivul enzimatic VB12 format din conjugat analogic-HRP de vitamina B12 intr-o matrice proteica de stabilizare.
In timpul testului, calibratorul, controlul sau specimentul de test si reactivul biotina VB12 sunt primele care se adauga in micro-godeurile captusite cu streptavidina. In timpul celor 45 minute de incubare, vitamina B12 din specimenul pacientului se leaga de anticorpii antivitamina B12 din reactivul biotina VB12, formand un complex imun. Biotina din reactivul biotina VB12 se leaga de streptavidina pe suprafata microgodeului, ancorand complexul imun. Dupa 45 de minute de incubare, reactivul enzimatic VB12 este adaugat direct in microgodeu si se incubeaza inca 30 de minute. Dupa adaugarea conjugatului enzimatic, are loc o reactie competitiva intre analogul de vitamina B12 din reactiv si vitamina B12 din specimenul pacientului, pentru cantitatea limitata a situsurilor de legare ale anticorpilor. Excesul de conjugat si proteinele serice sunt apoi eliminate prin spalare. In pasul urmator, substratul TMB se adauga pentru a detecta conjugatul HRP, si prezenta conjugatului este indicata prin aparitia culorii albastru. Reactia apoi este oprita cu solutie stop si absorbanta se determina utilizand un spectrofotometru la lungimea de unda 450/620- 630 nm. Activitatea enzimei este invers proportionala cu concentratia de vitamina B12 in calibrator, control sau specimentul pacientului. O curba de doza-raspuns (RDC) poate fi generata pentru a determina concentratia necunoscuta.
0 pareri
